金黄色葡萄球菌GapC蛋白与鼠伤寒沙门菌鞭毛蛋白的融合表达及其活性

摘要：

目的 在大肠埃希菌中融合表达金黄色葡萄球菌(taphlococcus.aure us,S.aureus)GapC蛋白与鼠伤寒沙门菌鞭毛蛋白,并检测其甘油醛-3磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)活性.方法 采用PCR技术分别扩增鼠伤寒沙门菌鞭毛蛋白flic基因和S.Aureus GapC基因,通过overlap PCR将这两段基因拼接并克隆至载体pQE30a,构建重组表达质粒pQE30-flic-GapC,将重组表达质粒转化E.coli XL-blue,IPTG诱导表达,表达产物经镍柱亲和层析试剂盒纯化后,进行SDS-PAGE及Western blot分析,并检测其GAPDH活性.结果 重组表达质粒pQE30-flic-GapC经双酶切及测序鉴定证明构建正确;表达产物相对分子质量约95 000,最佳诱导表达时间为5h,主要以包涵体形式存在,占菌体总蛋白的31.4％;纯化产物可与小鼠抗S.aureus全菌体多抗血清和抗鼠伤寒沙门菌全菌体多抗血清发生特异性反应,GAPDH活性为(0.337±0.019).结论 成功表达并纯化了具有较高生物学活性的flic-GapC融合蛋白,为S.aureus亚单位疫苗的研究奠定了基础.

关键词：金黄色葡萄球菌、鼠伤寒沙门菌、GapC蛋白、鞭毛蛋白、融合蛋白

所属期刊栏目：27

分类号：R378.1+1;R378.2+3(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：黑龙江省重大科技攻关项目GA09B301-2

在线出版日期：2014-03-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：168-171,176