动态显色法检测白喉毒素突变体CRM197的细菌内毒素含量
目的 建立检测白喉毒素突变体CRM197细菌内毒素(bacterial endotoxin)含量的动态显色法(kinetic chromogenic assay,KCA).方法 按照《中国药典》三部(2010版)要求,用细菌内毒素检查用水(bacterial endotoxin,BET)稀释细菌内毒素工作标准品制备细菌内毒素标准曲线系列溶液,各浓度均设3个平行孔,分别与动态显色鲎试剂(kinetic chromogenic analysis tachypleus amebocyte lysate,KCA TAL)反应,绘制标准曲线,验证标准曲线的可靠性,确定最佳线性范围、测定范围及最低检测限(limit of quantitation,LOQ),验证方法的精密性和准确性,并进行初步应用.结果 标准曲线的回归方程为:y=-0.263x+2.741,R2=0.997,相关系数的绝对值|r|≥0.980,阴性对照的反应时间大于标准曲线最低点的反应时间,各复孔的变异系数(CV)＜10％;内毒素浓度在0.02～2.50EU/ml时,线性关系良好,LOQ为0.02 EU/ml;3个浓度(2.50、0.50、0.02 EU/ml)标准内毒素检测结果的CV均＜5％,加入高、中、低3个浓度(2.50、0.50、0.02 EU/ml)标准内毒素的3批供试品检测结果的CV均＜10％,回收率在95％ ～ 143％之间;采用建立的方法检测10批次CRM197样品的细菌内毒素含量,回收率在77％～118％之间,其中8批样品的内毒素含量合格.结论 动态显色法检测CRM197中内毒素的含量精密性和准确性良好,能快速、定量检测样品中的内毒素含量,抗干扰能力强,可用于CRM197研制过程中的质量控制.
动态显色法、细菌内毒素、CRM197
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R392-33
国家国际科技合作项目2010DFB33450
2014-02-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共5页
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