钝顶螺旋藻超氧化物歧化酶的原核表达及纯化

摘要：

目的 原核表达并纯化钝顶螺旋藻超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD).方法 利用PCR技术扩增钝顶螺旋藻sod基因,克隆入原核表达载体pGEX-4T-1,构建重组表达质粒pGEX-4T-sod,转化大肠埃希菌BL21(DE3)pLysS,IPTG诱导表达.表达的重组融合蛋白SOD-GST利用蛋白纯化树脂Glutathione SepharoseTM 4 Fast Flow纯化后,采用改进的邻苯三酚自氧化法测定重组SOD的活性.结果 重组表达质粒pGEX-4T-sod经双酶切和测序证实构建正确;表达的融合蛋白SOD-GST的相对分子质量约为49 000,表达量占菌体总蛋白的30.2％,在重组菌裂解上清和沉淀中均有融合蛋白的表达;纯化的融合蛋白纯度为82.4％,浓度为2.8 mg/ml,从可溶性表达产物中纯化的酶的比活性为1 440U/mg.结论 在大肠埃希菌中成功表达并纯化了具有生物学活性的钝顶螺旋藻SOD,为其产业化生产奠定了基础.

关键词：钝顶螺旋藻、超氧化物歧化酶、原核细胞、基因表达、纯化、比活性

所属期刊栏目：26

分类号：Q554+.6;Q782(酶)

资助基金：内蒙古自然科学基金2013MS0521;内蒙古自治区应用术研究与开发资金计划;鄂尔多斯市科技创新基金

在线出版日期：2014-02-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：1764-1767