猪白细胞介素-2基因的原核表达、纯化及其生物学活性

摘要：

目的 原核表达、纯化猪白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2),并检测其生物学活性.方法 以提取的猪外周血淋巴细胞基因组RNA为模板,PCR扩增猪IL-2基因,插入原核表达载体pBV220,构建重组表达质粒pBV220/IL-2.将重组表达质粒转化感受态大肠埃希菌DH5α,经含Amp的LB平板筛选后,将重组菌于LB培养液中培养,分别于不同培养时间进行活菌计数,绘制重组菌的生长曲线;42℃诱导表达重组蛋白,经尿素纯化后,采用CTLL细胞/MTT比色法检测其生物学活性.结果 重组表达质粒经双酶切和测序鉴定构建正确;重组菌的最佳开始诱导时间为重组菌发酵培养10 h;重组蛋白相对分子质量约17 400,表达量占菌体总蛋白的19％,纯化后纯度达95％;重组蛋白的生物学活性可达3×105 IU/ml.结论 原核表达并纯化了具有生物学活性的重组猪IL-2蛋白,为其进一步研究和产业化生产奠定了基础.

关键词：白细胞介素-2、原核细胞、基因表达、生物活性

所属期刊栏目：26

分类号：Q786;R392-33(基因工程（遗传工程）)

在线出版日期：2014-02-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：1734-1737