卵巢癌相关抗原CA125单克隆抗体的制备
目的 制备卵巢癌相关抗原CA125R单克隆抗体,并进行鉴定.方法 将CA125一段串联重复序列(CA125R)基因克隆至原核表达载体pGEX-6P-l,构建重组表达质粒pGEX-CA125R,转化大肠埃希菌(E.coli)BL21(DE3),IPTG诱导表达GST-CA125R融合蛋白.表达的融合蛋白经GST亲和层析柱纯化后,免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备CA125单克隆抗体,Western blot法鉴定抗体的特异性,单克隆抗体亚类测定试剂盒分析单抗的亚类.腹水诱生法大量制备单抗,SDS-PAGE分析单抗的纯度,间接ELISA法检测单抗的效价.结果 重组原核表达质粒pGEX-CA125R经双酶切及测序,证实构建正确;纯化的GST-CA 125R融合蛋白相对分子质量约44 000,纯度约为95％,可与小鼠抗GST单克隆抗体发生特异性反应;获得1株可稳定分泌抗CA125单克隆抗体的杂交瘤细胞株3-B2,其分泌的单抗能特异识别GST-CA125R融合蛋白和天然CA125糖蛋白,其抗体亚型为IgG2a型;纯化的腹水单抗纯度约为90％,效价达1×106以上.结论 成功获得1株能特异性识别天然CA125糖蛋白的单克隆抗体细胞株,并经腹水诱生法大量制备了抗体,为CA125临床检测试剂盒的研发奠定了基础.
卵巢癌、肿瘤相关抗原、CA125、单克隆抗体
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R737.31;R392-33(肿瘤学)
国家自然科学基金81172016
2013-11-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共5页
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