重组人脂蛋白相关磷脂酶A2的原核表达及其纯化

摘要：

目的 原核表达并纯化重组人脂蛋白相关磷脂酶A2(lipoprotein-associated phospholipase A2,LP-PLA2),并初步确定其保存条件.方法 将重组表达菌pCold TF-LP-PLA2-BL21 (DE3)和pET28-HRV 3C-BL21 (DE3)分别经IPTG诱导表达,表达的重组蛋白经SDS-PAGE鉴定后,经Ni-Sepharose 6FF金属螯合层析粗提重组蛋白,经HRV 3C蛋白酶酶切去除融合标签后,用Blue Sepharose(R)6 Fast Flow(蓝胶)染料亲和层析及HiPrep 16/60 Sephacryl S-100 HR分子筛进行分离纯化;通过人LP-PLA2临床检测金标准ELISA试剂盒验证重组蛋白;将重组LP-PLA2置于含10 mmol/L CHAPS和0.5 mmol/L PMSF的PBS溶液中,分别于4℃、室温、37℃保存1周以及-20、-80℃冻存4个月后,确立重组蛋白的保存条件.结果 重组LP-PLA2相对分子质量约100 000,以可溶性形式表达,包涵体无表达;纯化后的重组LP-PLA2蛋白含量为3.68 mg/ml,蛋白回收率为21％,纯度可达95％,可被ELISA试剂盒识别,且具有良好的线性关系(R2=0.996 4);重组LP-PLA2于4℃保存1周,-20、-80 ℃冻存4个月,均无降解现象.结论 成功表达、纯化了重组LP-PLA2,并初步确定了其保存条件.

关键词：脂蛋白相关磷脂酶A2、标准品、表达、纯化

所属期刊栏目：26

分类号：Q556+.1;R446.1(酶)

资助基金：重庆市教委课题KJ120318

在线出版日期：2013-11-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1400-1404