枯草芽孢杆菌耐热丝氨酸蛋白酶基因的克隆与表达

摘要：

目的 克隆、表达枯草芽孢杆菌耐热丝氨酸蛋白酶基因,并检测其酶学性质.方法 从枯草芽孢杆菌染色DNA中,PCR扩增枯草芽孢杆菌耐热丝氨酸蛋白酶基因Sapr,插入载体pET-28a(+)中,构建重组分泌型表达质粒pET-28a-Sapr,热激转化大肠埃希菌(E.coli)BL21 (DE3),25及37℃条件下,IPTG诱导重组蛋白表达,表达的重组蛋白经10％ SDS-PAGE分析,并采用Folin法测定酶活性.结果 重组表达质粒经双酶切及PCR鉴定,证明构建正确,测序结果表明与GenBank中登录的序列同源性达100％;表达的重组蛋白相对分子质量约39 600,最佳诱导温度为25℃,主要以可溶性形式表达,表达量约占菌体总蛋白的12％;重组菌发酵产物酶活性为322 U/ml.结论 在大肠埃希菌中成功表达的特异蛋白具有生物学活性,为进一步研究改性分离蛋白的功能特性奠定了基础.

关键词：枯草芽孢杆菌、丝氨酸蛋白酶、大肠埃希菌、克隆、表达

所属期刊栏目：26

分类号：Q556+.4;Q786(酶)

在线出版日期：2013-11-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：1388-1391