TF-CTP-OD2-HA融合蛋白的原核表达及纯化

摘要：

目的 构建pCold-TF-CTP-OD2-HA原核表达质粒,在大肠杆菌中表达并纯化融合蛋白.方法 以前期构建的质粒p32a(+)CTP-OD-HA为模板,PCR扩增寡聚化结构域(Oligomerization domain,OD)中起关键作用的OD2基因序列,与胞浆转导肽(Cytoplasmic transduction peptide,CTP)和流感病毒血凝素抗原表位(Hemagglutinin,HA)连接后,克隆至pCold-TF-DNA质粒中,构建质粒pCold-TF-CTP-ODrHA,同时构建质粒pCold-TF-CTP-HA作为对照.将两种质粒分别转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达的融合蛋白经Ni-NTA亲和层析纯化后,进行SDS-PAGE和Western blot鉴定.结果 质粒pCold-TF-CTP-OD2-HA和pCold-TF-CTP-HA经PCR、双酶切和测序鉴定构建正确;表达的融合蛋白TF-CTP-OD2-HA和TF-CTP-HA相对分子质量分别约为63 000和58 000,两种融合蛋白均主要存在于破菌上清中,表达量分别约占菌体总蛋白的32％和25％,破菌沉淀中有少量表达;纯化的融合蛋白纯度均达95％以上,均可与鼠抗HA-tag多克隆抗体特异性结合.结论 成功构建了pCold-TF-CTP-OD2-HA原核表达质粒,在大肠杆菌中表达并纯化了融合蛋白,为后续研究其在CML中的作用机制奠定了基础.

关键词：慢性粒细胞白血病、寡聚化结构域、融合蛋白、表达、纯化

所属期刊栏目：26

分类号：Q784(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金资助项目30670901

在线出版日期：2013-11-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1384-1387,1391