HBsAg缺失型乙型肝炎病毒复制细胞模型的建立及其对乙型肝炎病毒复制的影响

摘要：

目的 体外构建HBsAg缺失型乙型肝炎病毒(HBV)复制细胞模型,并探讨HBsAg对HBV复制的影响.方法 定点突变pch9质粒上HBV 1.1倍体基因S蛋白表达区,构建HBV1.1倍体HBsAg突变质粒,并进行测序鉴定；将鉴定正确的突变质粒瞬时转染HepG2细胞,设未突变pch9质粒转染细胞作为对照,采用ELISA法检测转染72 h的细胞培养上清中HBsAg的表达；Southern blot及Real-time PCR法检测转染72 h的细胞内HBV DNA的复制水平.结果 定点突变质粒经测序证实构建正确；突变质粒转染72 h的细胞培养上清中HBsAg A450值为(0.06±0.003),表达呈阴性,对照细胞A450值为(1.82±0.010),表达呈阳性,转染突变质粒72 h的细胞内HBV DNA条带浓度明显高于转染未突变质粒的细胞；转染突变质粒的细胞内HBV DNA绝对拷贝数分别为9.33×106、5.26×106,约为转染未突变质粒(6.91×105)的7.6～ 13.5倍.结论 已成功构建了HBsAg缺失型HBV复制细胞模型,为HBV DNA复制及相关研究提供了实验依据；推测HBsAg是HBV DNA形成的自限性因素,能够负调控HBVDNA复制.

关键词：肝炎病毒,乙型、表面抗原、突变、模型

所属期刊栏目：26

分类号：R373.2+1;Q939.44(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家自然科学基金81000732;四川省教育厅重点基金13ZA0221;川北医学院科研发展计划CBY12-A-ZP01

在线出版日期：2013-09-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：1063-1066