深黄被孢霉△5-脱饱和酶的原核表达及纯化

摘要：

目的 原核表达并纯化深黄被孢霉△5-脱饱和酶.方法 采用RT-PCR技术扩增深黄被孢霉△5-脱饱和酶基因,插入表达载体pET-30a(+)中,构建重组表达质粒pET-D5D,转化人大肠埃希菌(E coli BL21(DE3)中,IPTG诱导表达.表达的重组蛋白经Ni2+-NTA纯化后,进行Western blot鉴定.结果 重组表达质粒pET-D5D经双酶切(NotⅠ/SalⅠ)和测序鉴定,证明构建正确；表达的重组蛋白相对分子质量约为55 000,诱导6h表达量较高,主要以包涵体形式表达；纯化的重组蛋白可与兔抗△5-脱饱和酶多克隆抗体特异性结合.结论 成功在E.coli中表达了深黄被孢霉△5-脱饱和酶,纯化后的重组蛋白反应原性良好,为进一步研究A5-脱饱和酶的功能奠定了基础.

关键词：深黄被孢霉、△5-脱饱和酶、原核细胞、基因表达、纯化

所属期刊栏目：26

分类号：Q939.14+9;Q939.97(微生物学)

资助基金：国家自然科学基金项目资助31171657;黑龙江省青年科学基金项目Q2010093

在线出版日期：2013-09-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：923-926