人凝血因子Ⅶ在CHO-K1细胞中的表达与鉴定
目的 在CHO-K1细胞中表达人凝血因子Ⅶ(human coagulation factorⅦ,hFⅦ).方法 利用脂质体转染法,将表达质粒pcDNA3.1-FⅦ和空载体pcDNA3.1分别转染CHO-K1细胞,经900 μg/ml G418筛选抗性细胞株.收集细胞培养上清,采用ELISA法检测细胞培养上清中rhFⅦ的水平;PT法检测细胞培养上清的凝血时间;Western blot法检测细胞培养上清中rhFⅦ的表达.结果 共获得3株抗性细胞,分别命名为CHO-FⅦ01 ~ 03,空载体转染的细胞命名为CHO-CK;CHO-FⅦ01~ 03细胞培养上清中均检测到了rhFⅦ,但含量均低于阳性对照;CHO-CK细胞培养上清的凝血时间分别为CHO-FⅦ01~03细胞培养上清的2.4、2.1和3.1倍;CHO-FⅦ01~ 03细胞培养上清中含目的蛋白rhFⅦ,相对分子质量约为50 000.结论 成功在CHO-K1细胞中表达了hFⅦ,为下一步hFⅦ的深入研究及应用奠定了基础.
人凝血因子Ⅶ、CHO-K1细胞、稳定转染、基因表达
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R457.1+2;Q786(治疗学)
2013-07-30(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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