抗犬瘟热病毒噬菌体抗体库的构建

摘要：

目的 构建抗犬瘟热病毒(canine distemper virus,CDV)T7噬菌体单链抗体(single-chain antibody fragment,scFv)库.方法 用灭活CDV经皮下注射免疫犬,共3次,每次间隔2周,第3次免疫后2周采集犬外周血,分离淋巴细胞,提取淋巴细胞总RNA,RT-PCR分别扩增犬IgG重链(heavy chain,VH)和轻链(light chain,VL)基因片段,通过SOE-PCR法将VH和VL用一段linker连接组装成scFv基因,经EcoR Ⅰ和HindⅢ双酶切后,连接到表达载体T7 Select 10-3b上,用包装蛋白包装后,以大肠埃希菌BLT5403为宿主菌进行增殖,随机挑取50个噬菌斑,进行PCR鉴定,并测定文库滴度.结果 扩增的VH和VL基因大小均与预期相符,测序结果经blast比对,扩增的片段与犬IgG的VH和VL序列匹配率达90％以上；所构建的原始文库滴度为3.2×107 pfu/ml,扩增后的文库滴度为5.0×108 pfu/ml.对随机挑取的50个噬菌斑进行PCR鉴定,重组率为94％.结论 成功构建了抗CDV的T7噬菌体抗体库,为犬科动物犬瘟热的防治提供了参考.

关键词：犬瘟热病毒、单链抗体、噬菌体展示文库

所属期刊栏目：26

分类号：Q939.94;R392-33(微生物学)

资助基金：吉林省科技发展计划青年科研基金201201014;吉林大学基本科研业务费项目450060481144;吉林大学农学部引进人才科研启动基金4305050L02Q7;吉林大学国家级"大学生创新性实验计划"2011A81141

在线出版日期：2013-07-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：813-816