金黄色葡萄球菌肠毒素B的原核表达及纯化

摘要：

目的 原核表达并纯化金黄色葡萄球菌肠毒素B(staphylococcal entertoxin B,SEB).方法 以合成的SEB全基因序列为模板,PCR扩增SEB基因片段,插入原核表达载体pET-28a中,构建重组表达质粒pET-28a-SEB,转化E.coil BL21 (DE3),IPTG诱导表达.表达的重组蛋白经硫酸铵盐析、SP阳离子层析柱、Chelating金属鳌合层析铜(Cu2+)柱纯化后,用Thrombin切除组氨酸标签,再经Chelating金属鳌合层析铜(Cu2+)柱和DEAE阴离子层析柱纯化.结果 重组原核表达质粒pET-28a-SEB经双酶切及测序证明构建正确；表达的重组蛋白相对分子质量约为31000,主要以可溶性形式表达,表达量约占菌体总蛋白的30％.最终纯化后的重组SEB蛋白纯度可达90％以上.结论 成功构建了SEB基因重组原核表达质粒,在大肠杆菌中表达并纯化了重组SEB蛋白,为进一步研究其致病机理及防控方法奠定了基础.

关键词：葡萄球菌,金黄色、肠毒素B、原核细胞、基因表达、纯化

所属期刊栏目：26

分类号：R378.1+1;Q786(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

在线出版日期：2013-07-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：804-806,812