结核分枝杆菌ATP依赖的丝氨酸蛋白酶蛋白水解亚基1基因的原核表达

摘要：

目的 构建结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)ATP依赖的丝氨酸蛋白酶蛋白水解亚基1(ATPdependent Clp proteolytic subunit 1,ClpP1)基因重组原核表达质粒,并在大肠埃希菌中表达重组蛋白.方法 从结核分枝杆菌H37Rv株基因组DNA中PCR扩增ClpP1基因,插入原核表达载体pET-32a(+)中,构建重组表达质粒pET-32a(+)-ClpP1,转化大肠埃希菌B21 (DE3),IPTG诱导表达.表达产物经SDS-PAGE和Western blot进行鉴定.结果 重组表达质粒pET-32a(+)-ClpP1经双酶切和测序鉴定,证明构建正确；表达的重组蛋白相对分子质量约35 000,可与鼠抗His单克隆抗体特异性结合.结论 成功构建了重组表达质粒pET-32a(+)-ClpP1,并在大肠埃希菌中表达了重组蛋白,为进一步研究ClpP1蛋白在MTB中的生物学特性奠定了基础.

关键词：结核分枝杆菌、ATP依赖的丝氨酸蛋白酶蛋白水解亚基1、原核细胞、基因表达

所属期刊栏目：26

分类号：R378.91+1;Q784(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家自然科学基金青年基金项目81101216

在线出版日期：2013-07-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：792-794,803