抗菌肽PR-39重组腺病毒表达质粒的构建及鉴定

摘要：

目的 构建抗菌肽PR-39(Proline-arginine rich 39-amino acid peptide,PR-39)重组腺病毒表达质粒.方法 从含抗菌肽PR-39核心编码区的质粒中扩增PR-39基因,亚克隆至穿梭质粒pAdTrace-TO4中,构建重组穿梭质粒,经PmeⅠ酶切线性化后,转化感受态AdEasier细胞,构建重组腺病毒质粒,转染HEK293细胞,包装出重组腺病毒,扩增后进行病毒滴度检测.将重组腺病毒感染鼠胚胎间充质干细胞C3H10T1/2,通过荧光显微镜观察红色荧光蛋白(Red fluorescent protein,RFP)的表达,RT-PCR法检测PR-39基因的转录水平.结果 重组腺病毒穿梭质粒pAd-Trace-TO4-PR-39经Kpn Ⅰ和HindⅢ双酶切及测序鉴定证明构建正确;重组腺病毒质粒pAdPR-39经Pac Ⅰ酶切鉴定,证明目的基因已整合到腺病毒基因组中;第4代重组腺病毒AdPR-39的病毒滴度为1010 IU/ml;感染重组腺病毒AdPR-39的C3H10T1/2细胞可表达RFP; PR-39基因在C3H10T1/2细胞内成功转录.结论 已成功构建携带RFP的PR-39重组腺病毒表达质粒,在鼠胚胎间充质干细胞C3H10T1/2中可高效表达.

关键词：抗菌肽、腺病毒、基因表达、红色荧光蛋白

所属期刊栏目：26

分类号：Q782;Q786(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金资助项目81071490

在线出版日期：2013-07-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：616-620