伤寒Vi多糖柱层析纯化工艺的优化
目的 优化伤寒Vi多糖柱层析纯化工艺,以替代传统苯酚抽提、乙醇分级沉淀法.方法 采用DEAE离子交换层析柱,分别在缓冲液(20 mmol/L Tris-C1)pH值为6.0、7.0和8.0的条件下纯化1批伤寒Vi多糖粗糖,并与传统苯酚抽提、乙醇分级沉淀法进行比较.按《中国药典》三部(2010版)要求检测纯化样品的蛋白质含量、核酸含量、O-乙酰基含量、分子大小及内毒素含量,并计算样品的多糖回收率.采用优化的DEAE柱层析纯化工艺纯化3批伤寒Vi多糖粗糖,验证该工艺的稳定性.结果 DEAE离子交换柱缓冲液(20 mmol/L Tris-Cl)pH值为7.0和8.0时,可有效将伤寒Vi多糖的杂质与纯化产物分离,多糖回收率分别为36.52％和38.35％,明显高于传统工艺的多糖回收率(15.52％),且纯化产物的内毒素含量(10 EU/μg)明显低于传统工艺(200 EU/μg).以优化工艺(pH 7.0)纯化3批伤寒Vi多糖粗糖获得的6批精糖的蛋白质含量、核酸含量、O-乙酰基含量、分子大小、内毒素含量及多糖回收率差异较小,标准偏差均小于5％.结论 优化了伤寒Vi多糖柱层析的纯化工艺,该工艺稳定性良好,可替代传统苯酚抽提、乙醇分级沉淀法,应用于伤寒Vi多糖的纯化.
伤寒、Vi多糖、层析、优化
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R378.2+3;R392-33(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
2013-08-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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