CHO-DG44细胞瞬时转染条件的优化
目的 优化CHO-DG44细胞瞬时转染的条件.方法 采用TubeSpin一次性生物反应器,以绿色荧光蛋白(Green fluorescence protein,GFP)为报告基因,氯醚酰亚胺(Polyether imide,PEI)为转染试剂,将质粒pIRESneo3-eGFP瞬时转染CHO-DG44细胞,优化瞬时转染的基本条件[细胞密度、DNA浓度和DNA:PEI比例(w/w)]以及其他条件(换液、渗透压和温度),采用优化的条件转染质粒pIRESneo3-eGFP,流式细胞术检测细胞转染效率,生物发光仪检测相对荧光强度.结果 CHO-DG44细胞瞬时转染的最佳条件为:采用XLG-P8培养基进行转染,细胞密度为2×106个/ml,DNA浓度为6.25μg/5 ml,DNA∶PEI(w/w)比例为1∶5；转染后4h更换新鲜培养基,添加30 mmol/L NaCl,并于31℃继续培养.在此条件下,CHO-DG44细胞的瞬时转染效率可达81.45％,相对荧光强度可达9×105 RFU/106 cells.结论 优化了CHO-DG44细胞瞬时转染的条件,为下一步药物蛋白的研发奠定了基础.
CHO-DG44细胞、转染、瞬时表达、优化
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Q819(生物工程学(生物技术))
国家"十二五"重大新药创制项目2012ZX09202-301-001;广东省产学研项目2010B090400500;暨南大学科研培育与创新基金11612110;广州市重大科技专项计划项目2010U1-E00541;"重大新药创制"国家科技重大专项2011ZX09506-006
2013-08-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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