牙本质基质蛋白1功能片段的融合表达及其胞内定位

摘要：

目的 构建含单核苷酸多态性(Single nucleotide polymorphism,SNP)位点不同碱基的37 kD的N-牙本质基质蛋白1(Dentin matrix protein 1,DMP1)和全长DMP1基因重组表达质粒,并分析重组蛋白在HEK293细胞中的表达及定位.方法 利用定点突变改造DMP1基因,获得DMP1基因的SNP rs10019009的不同基因型,将含SNP位点不同碱基的37 kD N-DMP1和全长DMP1基因定向克隆入含增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein,EGFP)的质粒pcDNA3.1-EGFP中,构建重组质粒pcDNA3.1-DMP1-EGFP,通过脂质体法瞬时转染HEK293细胞,荧光显微镜观察重组融合蛋白DMP1-EGFP的表达及胞内定位.结果 DNA测序结果表明,定点突变后的DMP1基因的碱基序列与设计序列完全一致；PCR和DNA测序显示重组质粒pcDNA3.1-DMP1-EGFP构建正确；融合蛋白DMP1-EGFP在HEK293细胞中主要表达于细胞胞浆中.结论 成功构建了含rs10019009-SNP位点不同碱基的37 kD的N-DMP1和全长DMP1基因重组表达质粒,并在HEK293细胞的胞浆中有效表达,为进一步研究DMP1基因的功能奠定了基础.

关键词：牙本质基质蛋白1、绿色荧光蛋白、融合表达、胞内定位

所属期刊栏目：26

分类号：Q786;R392-33(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家科技支撑计划2013BAI07B02

在线出版日期：2013-08-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：491-494