胰岛素诱导基因-2启动子荧光素酶报告基因重组质粒的构建与鉴定

摘要：

目的 构建胰岛素诱导基因-2(Insulin induced gene-2,Insig-2)启动子荧光素酶报告基因重组质粒,并检测其转录活性.方法 从人基因组DNA中扩增Insig-2基因转录起始位点上游1 389 bp的启动子片段,插入pGL3-basic质粒中,构建重组质粒pGL3-Insig-2,将其与内参质粒pRL-TK瞬时共转染HEK293、HepG2和3T3-L1细胞,采用双荧光素酶法检测Insig-2启动子活性.结果 重组质粒pGL3-Insig-2经双酶切和DNA测序,证实构建正确；pGL3-Insig-2质粒在HEK293、HepG2和3T3-L1细胞中均具有启动子活性,分别为阴性对照组(pGL3-basic空载体)的28、40和214倍、阳性对照组(pGL3-SV40)的2.6、5.5和30倍,呈现出强启动子活性.结论 成功构建了Insig-2基因启动子荧光素酶报告基因重组质粒,为后续Insig-2基因的深入研究奠定了基础.

关键词：胰岛素诱导基因-2、启动子、荧光素酶、报告基因

所属期刊栏目：26

分类号：Q782(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金资助项目30600812

在线出版日期：2013-08-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：465-468