重组EB病毒Zta蛋白的原核表达及纯化

摘要：

目的 原核表达重组EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)Zta蛋白,并进行纯化.方法 PCR扩增EBV B95-8株BZLF1n氨基端基因,分别插入pThioHisA和pcDNA3.1载体中,构建重组表达质粒pThioHisA-BZLF1n和pcDNA3.1-BZLF1n.用pcDNA3.1-BZLF1n质粒免疫ICR小鼠,制备抗血清.将质粒pThioHisA-BZLF1n转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,优化诱导表达条件.表达产物经亲和层析后,用肠激酶切割,再经离子交换层析,纯化产物进行SDS-PAGE和Western blot分析.结果 重组表达质粒经双酶切和测序证明构建正确.表达的重组蛋白相对分子质量约为32 000; IPTG终浓度为0.1 mmol/L,37℃诱导6h,目的蛋白的表达量最高,占菌体总蛋白的30％以上；重组蛋白以包涵体和可溶性两种形式表达.纯化的重组蛋白相对分子质量约为18 000,纯度大于95％,可与制备的小鼠抗血清发生特异性反应.结论 在大肠杆菌中高效表达了重组EBV Zta蛋白,纯化的重组蛋白纯度较高,特异性良好,为EBV相关疾病的早期诊断筛查奠定了基础.

关键词：EB病毒、Zta蛋白、原核细胞、基因表达、纯化

所属期刊栏目：26

分类号：R373.1+1(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家高技术研究发展计划"863计划"2012AA02A406;云南省创新团队2011CI140

在线出版日期：2013-08-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：460-464