WT1蛋白CTL表位肽基因载体的构建与鉴定

摘要：

目的 构建WT1 (Wilms' tumor gene 1)蛋白CTL表位肽基因载体,并检测其在293T细胞中的转录.方法 设计分别含WT1-126肽、WT1-235肽以及这两种肽的基因载体,并加入Th通用表位Pan-DR-Th(PADRE),应用蛋白酶体切割软件PAProC和NetChop优化各表位和间隔序列,DNA疫苗在线预测工具DyNAVacS优化真核密码子后,人工合成核苷酸序列,分别插入pUC57载体,构建pUC57-WT1质粒,测序鉴定后,酶切回收各目的片段,亚克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建重组真核表达质粒,转染293T细胞,RT-PCR检测各目的基因在293T细胞中的转录.采用无内毒素质粒大量提取试剂盒提取各重组质粒,采用紫外分光光度计测定质粒的纯度和浓度.结果 各重组真核表达质粒经双酶切及测序鉴定证实构建正确；重组质粒携带的目的基因可在293T细胞中成功转录；各重组质粒DNA的纯度均合格,浓度在864.6 ～ 883.9 μg/ml之间.结论 成功构建了WT1蛋白CTL表位肽基因载体,并能在真核细胞中正常转录,为下一步在小鼠体内探讨特异性不同的CTLs群发挥抗肿瘤作用的机制奠定了基础.

关键词：WT1蛋白、细胞毒性T淋巴细胞、表位肽、DNA疫苗

所属期刊栏目：26

分类号：Q782(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然基金专项81041081

在线出版日期：2013-08-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：448-451