重组人β-神经生长因子在昆虫细胞中的表达、纯化及其生物学活性

摘要：

目的 在昆虫细胞中表达重组人β-神经生长因子(Recombinant human β nerve growth factor,rhβ-NGF),并对表达产物进行纯化和生物学活性鉴定.方法 构建rhβ-NGF杆状病毒表达质粒Bacmid+[rhβ-NGF],利用脂质体cellfectionⅡ将质粒转染至昆虫细胞Sf9中,用转染细胞的上清反复感染Sf9细胞,大量收获含目的蛋白的培养上清,利用离子交换层析和分子筛层析纯化rhβ-NGF,纯化产物经SDS-PAGE和Western blot分析,并通过鸡胚背根神经节培养法检测rhβ-NGF的生物学活性.结果 重组表达质粒Bacmid+ [rhβ-NGF]经测序证实构建正确；重组病毒感染的Sf9细胞可表达rhβ-NGF;纯化的rhβ-NGF蛋白经SDS-PAGE分析,可见相对分子质量约14 200的单一条带,纯度大于98％,能与兔抗人NGF单克隆抗体特异性结合,并能刺激神经节突起生长,其比活性约为600 000 AU/mg.结论 成功在昆虫细胞中表达了有生物学活性的rhβ-NGF,为其大量制备奠定了基础.

关键词：神经生长因子、杆状病毒表达系统、昆虫细胞、纯化、生物活性

所属期刊栏目：26

分类号：Q189;Q786(寄生生物学)

在线出版日期：2013-05-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：332-334,339