猪呼吸道疾病综合征4种病原菌复合PCR方法的建立及其初步应用
目的 建立检测猪呼吸道疾病综合征(Porcine respiratory disease complex,PRDC)中肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae,Mhp)、猪链球菌(Streptococcus suis,SS)、副猪嗜血杆菌(Haemophilus Paraasuis,HPS)和猪多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)的四重PCR方法.方法 根据GenBank中登录的Mhp的P36基因序列设计引物,同时参考文献分别合成SS、HPS和Pm的特异性引物,通过4因素(Taq酶、Mg2+、引物、dNTPs)4水平的L16(4a)正交试验优化PCR反应体系,建立检测Mhp、SS、HPS和Pm的四重PCR方法,并进行特异性、敏感性及重复性验证.运用该方法及单一PCR方法,对PRDC猪的鼻腔拭子及肺脏组织样品进行检测,另对肺脏组织样品进行SS、HPS和Pm的常规分离鉴定.结果 确立了四重PCR方法最适反应体系及反应条件；应用建立的四重PCR方法在568、294、821和457 bp处均可见与预期相符的特异性条带,8次重复扩增后的电泳结果一致,最低检测限量分别为560、260、280和200 pg,表明该方法特异性、敏感性及重复性较好；PRDC猪的鼻腔拭子及肺脏组织样品的四重PCR方法检测结果与单一PCR方法相比,差异无统计学意义(P＞0.05),四重PCR及单一PCR方法的HPS的检出率则显著高于常规细菌分离鉴定(P＜0.05).结论 所建立的四重PCR方法,可直接用于临床PRDC 4种病原菌的鉴定,为开展PRDC流行病学调查提供了有效的技术手段.
肺炎,支原体、链球菌属、嗜血菌属、多杀性巴氏杆菌、聚合酶链反应
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R446.5(诊断学)
安徽省长三角联合攻关项目1101c0603065;安徽省"十一五"科技攻关项目07010302144;安徽省生猪产业技术体系项目资助
2013-04-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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