重组干酪乳杆菌贮存期内质粒稳定性及活菌数的检测

摘要：

目的 检测产肠毒素性大肠杆菌(Enterotoxigenic E.coli,ETEC)基因重组干酪乳杆菌(Lactobacillus casei,L.casei)贮存过程中质粒的稳定性及活菌数的变化.方法 将ETEC K88重组于酪乳杆菌(pLA-K88/L.casei)接种于MRS培养基,转种WPC培养基,收集菌液,置4、15、37℃贮存.通过抗生素MRS(+)和MRS(-)平板计数菌落数的方法及PCR法检测重组质粒在4℃贮存1、15、30、60、90和120 d的稳定性；Dot ELISA法检测菌液外源蛋白免疫学活性的变化；平板计数法检测4、15、37℃贮存1、2、3、7、15、30、60、90、120、210和240 d的活菌数.结果 在4℃贮存120 d内,重组质粒稳定性良好,目的基因片段无缺失,外源蛋白活性稳定,乳清蛋白对工程菌的稳定性及外源蛋白的免疫原性均无影响；工程菌在4℃贮存效果最好,存活时间最长,第240 d活菌数仍保持在9×106 cfu/ml以上,15和37℃贮存期仅为90和15d.结论 ETEC基因重组干酪乳杆菌于4℃贮存条件下,质粒及外源基因表达稳定.

关键词：干酪乳杆菌、质粒稳定性、活菌数

所属期刊栏目：26

分类号：R378.99+2;Q789(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：黑龙江省农垦总局科技攻关项目HNK10A-08-03-03;2012年黑龙江省大学生创新训练项目YJSCX2011-248HLJ

在线出版日期：2013-04-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：222-224,229