小鼠Hes1基因过表达逆转录病毒载体的构建及其在小鼠Lin-造血细胞中的表达
目的 构建过表达Hes1基因的逆转录病毒载体,并通过感染相对原始的小鼠Lin-造血细胞检测其感染效率.方法 通过RT-PCR法从B6小鼠骨髓细胞中扩增Hes1基因功能区,将扩增产物连接入逆转录病毒载体MSCV-ICN1-IRES-GFP,构建重组逆转录病毒载体MSCV-Hes1-IRES-GFP,瞬时转染293T细胞,设转染空载体的细胞为对照组,流式细胞仪检测转染效率,Realtime PCR检测Hes1基因的表达；将重组逆转录病毒载体MSCV-Hes1-IRES-GFP及空载体与Lipofectamine 2000混合后,转染293T细胞,包装重组逆转录病毒,稳定感染小鼠Lin-细胞,设感染空载体病毒的细胞为对照组,流式细胞仪检测感染效率,Realtime PCR检测Hes1基因的表达.结果 测序证实重组逆转录病毒载体构建正确；转染293T细胞后第3天,重组逆转录病毒的转染效率约为95％,Hes1基因表达量约为对照组的5倍；病毒上清感染Lin-细胞后第4、5天,重组逆转录病毒的感染效率约为7％,Hes1基因的表达量约为对照组的6倍.结论 已成功构建了过表达Hes1基因的重组逆转录病毒载体,并在小鼠Lin-细胞中稳定表达,为研究白血病环境下Hes1对造血干祖细胞的作用奠定了基础.
Hes1基因、真核细胞、基因表达、逆转录病毒载体、Lin-细胞
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Q782(基因工程（遗传工程）)
2013-04-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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