日本血吸虫亮氨酸氨基肽酶的原核表达及纯化

摘要：

目的 原核表达并纯化日本血吸虫亮氨酸氨基肽酶(Leucine aminopeptidase of Schistosomajaponicum,SjLAP).方法 从日本血吸虫成虫中RT-PCR扩增LAP基因,克隆至原核表达载体pET-28a中,转化感受态E.coli BL21 (DE3),IPTG诱导表达,表达的重组曲LAP蛋白(rSjLAP)经SDS-PAGE和Western blot分析后,经His Binding Purification Kit 层析纯化,纯化的rSjLAP蛋白经SDS-PAGE分析纯度,Bradford法测定浓度.结果 克隆的SjLAP基因与GenBank中登录的基因序列比较有2个碱基发生置换,导致对应的2个氨基酸发生置换,但均不在关键区域；重组表达质粒pET-28a/SjLAP经双酶切鉴定证实构建正确；表达的rSjLAP蛋白相对分子质量约45 000,诱导4h表达量最高；纯化的rSjLXP蛋白纯度较高,浓度达5.0 mg/ml,并可被抗小鼠His-tag单抗及血吸虫感染的患者血清和兔血清特异性识别,具有良好的反应原性.结论 成功在大肠杆菌中表达了rSjLAP蛋白,纯化的rSjLAP纯度较高,为血吸虫病的诊断和预防等研究奠定了基础.

关键词：血吸虫,日本、亮氨酸氨基肽酶、原核细胞、基因表达、诊断

所属期刊栏目：26

分类号：R383.2+4;R392-33(医学寄生虫学)

资助基金：安徽省教育厅自然科学重点项目KJ2011A205

在线出版日期：2013-04-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：196-199