瓣状内切核酸酶1基因重组真核表达质粒的构建及鉴定

摘要：

目的 构建瓣状内切核酸酶1 (Flap endonuclease 1,FEN1)基因重组真核表达质粒,并进行鉴定.方法 提取L02细胞总RNA,逆转录合成cDNA,经巢式PCR扩增FEN1基因,定向克隆至载体pcDNA3.1,构建重组真核表达质粒,经酶切及测序进行鉴定.将鉴定正确的真核表达质粒转染293T细胞,Western blot检测FEN1蛋白的表达.结果 FEN1基因重组真核表达质粒经酶切及测序鉴定证明构建正确；在相对分子质量约47 000处可见目的蛋白条带,转染细胞中FEN1蛋白表达量较空载体转染组及空白细胞对照组提高约3倍.结论 已成功构建了FEN1基因重组真核表达质粒,并可在293T细胞中过表达FEN1.

关键词：瓣状内切核酸酶1、真核细胞、基因表达

所属期刊栏目：26

分类号：Q782(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金81000732/H1904

在线出版日期：2013-04-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：181-183,187