宇佐美曲霉羧肽酶成熟肽基因的表达及鉴定

摘要：

目的 克隆、表达宇佐美曲霉(A spergillus usami)羧肽酶成熟肽基因,并检测其酶学性质.方法 根据前期克隆的宇佐美曲霉羧肽酶基因序列设计引物,克隆羧肽酶成熟肽基因AucpA,构建重组表达质粒pPIC9k-A ucpA,电击转化毕赤酵母GS115,甲醇诱导重组蛋白表达.表达的重组蛋白经Sephadex-50层析纯化后,进行酶活性及其影响因素的检测.结果 重组表达质粒pPIC9K-A ucpA经双酶切及测序证明构建正确；表达的重组蛋白相对分子质量约81 000,纯化的重组羧肽酶最高比酶活为57.15 nkat/mg,最适反应温度为45℃,最适反应pH为3.5,金属离子、EDTA对重组羧肽酶的酶活性无影响,而PMSF对重组羧肽酶酶活性的抑制率达50％以上.结论 已成功在毕赤酵母中表达了具有较高酶活的宇佐美曲霉羧肽酶,为进一步研究该重组酶的应用奠定了基础.

关键词：宇佐美曲霉、羧肽酶、基因表达、酶学

所属期刊栏目：26

分类号：Q556+.5;Q786(酶)

资助基金：国家自然科学基金311012299

在线出版日期：2013-04-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：176-180