无乳链球菌GapC蛋白和鼠伤寒沙门菌鞭毛蛋白的融合表达及纯化
目的 构建无乳链球菌(Streptococcus agalactiae,S.agalactiae)gapC基因和鼠伤寒沙门菌(Salmonella typhimurium,S.typhimurium)fliC基因的融合基因gapC-fliC,并在大肠杆菌中表达融合蛋白.方法 应用PCR技术分别扩增鼠伤寒沙门菌鞭毛蛋白fliC基因和无乳链球菌gapC基因片段,通过柔性肽(Gly4Ser)2编码序列将二者串联并克隆至质粒pQE-30上,构建重组原核表达质粒fliC-gapC-pQE30,转化E..coli XL1-Blue,IPTG诱导表达,并进行SDSPAGE分析.表达产物经镍离子亲和层析柱纯化后,进行Western blot分析及融合蛋白活性检测.结果 重组表达质粒fliC-gapC-pQE-30经双酶切和测序证明构建正确；表达的融合蛋白FIiC-GapC相对分子质量约95 000,表达量占菌体总蛋白的58％,主要以包涵体形式存在,且可与小鼠抗鼠伤寒沙门菌和抗无乳链球菌多抗血清发生特异性反应,具有较好的甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)活性.结论 成功构建了重组表达质粒fliC-gapC-pQE-30,并在E.coli XLl-Blue中表达了融合蛋白,为下一步动物免疫保护性试验的研究奠定了基础.
链球菌,无乳、沙门菌,鼠伤寒、鞭毛蛋白、重组融合蛋白质类
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R378.2+2;R392-33(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
国家自然科学基金项目31072120;黑龙江省研究生创新科研项目YJSCX2011-279HLJ
2013-04-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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