人呼吸道合胞病毒蛋白F1片段在大肠杆菌中的表达及纯化
目的 在大肠杆菌中表达人呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial virus,RSV)F1蛋白主要抗原表位集中的137 ～ 523 aa片段,并对其进行纯化,检测其免疫原性.方法 采用RT-PCR扩增RSV F1基因片段,与pThioHisA载体连接,构建重组表达质粒pThioHisA-RSV F1,转化大肠杆菌Topl0,IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE分析；表达的融合蛋白经稀释复性、离子交换及亲和层析纯化后,进行SDS-PAGE及Western blot分析；将纯化的融合蛋白RSVF1经皮下多点注射分别免疫ICR小鼠,实验分为3组:RSV F1无佐剂组(RSV F1,50μg/只)、RSV F1佐剂组(50 μg RSV F1+5μg nOMV佐剂)和阴性对照组(PBS,100μl/只),于第3周加强免疫1次,第4周尾静脉采血,分离血清,采用间接ELISA法检测其免疫原性.结果 经双酶切鉴定及DNA测序证明重组表达质粒pThioHisA-RSV F1构建正确；表达的融合蛋白相对分子质量约56 000,主要以包涵体形式表达,表达量约占细胞总蛋白的36％；纯化的融合蛋白纯度可达95％,并可与RSV-F1多克隆抗体发生特异性抗原抗体反应；与阴性对照组相比,RSV F1免疫的小鼠血清特异性IgG水平明显提高(P＜ 0.05).结论 已成功地在大肠杆菌中高效表达了RSV FI片段,纯化的融合蛋白在小鼠体内具有良好的免疫原性,为进一步研究RSV F蛋白亚单位疫苗奠定了基础.
呼吸道合胞病毒,人、F1蛋白、基因表达、纯化、免疫原性
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R373.2;R392-33(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
云南省自然科学基金资助项目2009ZC186M
2013-04-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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