呼吸道合胞病毒截短G蛋白的原核表达、纯化及其免疫原性
目的 构建呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial virus,RSV)截短G蛋白的原核表达载体,并对表达、纯化后的蛋白进行免疫原性及相关免疫指标的检测.方法 人工合成G蛋白基因的部分核酸序列,采用重叠PCR法将CX3C模序替换为RSV M蛋白上的CTL表位,构建原核表达载体GCX3C-pET22b和GCTL-pET22b,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达.表达产物经SDS-PAGE鉴定后,采用Ni2+亲和层析柱纯化目的蛋白.纯化产物经SDS-PAGE及Western blot鉴定后,免疫昆明小鼠,实验分GCC组(100μg GCX3C)、GCTL组(100μg GCTL)、阴性对照组(100μl PBS),分别于0、1、4周经小鼠双后侧肌肉注射免疫,经尾梢静脉取血,分离血清,检测IgG水平及嗜酸性粒细胞的数量,并通过小鼠体外淋巴细胞杀伤试验鉴定RSV特异性CTL应答.结果 重组原核表达载体经双酶切及测序鉴定,证明G蛋白基因改造成功；重组蛋白的相对分子质量约14 000,表达量约占菌体总蛋白的40％,主要以可溶性形式表达；纯化的重组蛋白纯度达90％以上,可与抗RSV血清发生特异性反应；小鼠血清中的特异性IgG水平随免疫次数的增加而升高(P＜0.01),GCX3C蛋白和GCTL蛋白的几何平均滴度分别为1 584.89和1 995.26; GCX3C组较GCTL组小鼠血清中嗜酸性粒细胞数量明显增加(P＜0.01)；GCTL蛋白免疫小鼠后可产生RSV特异性的CTL应答效应.结论 已成功原核表达了GCX3C蛋白和GCTL蛋白,两种蛋白均有较好的免疫原性,GCTL蛋白可消除由CX3C模序引起的嗜酸性粒细胞增多,并增强了CTL效应,G蛋白基因的改造达到了预期效果.
呼吸道合胞病毒、G蛋白、CX3C、免疫原性、CTL
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R373.1;R392-33(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
国家自然科学基金项目30872398;云南省应用基础研究项目2007C032M
2013-04-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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149-154
