肠道病毒71型3C基因原核表达质粒的构建表达及纯化

摘要：

目的 构建肠道病毒71型(Entervirus71,EV71)3C基因的原核表达质粒,在大肠杆菌中进行表达并纯化.方法 以病毒的反转录产物为模板,PCR扩增EV71 3C基因,克隆至pGEx-4T-1载体中,构建重组表达质粒pGEx-3C,转化大肠杆菌BL21 (DE3)中,IPTG诱导表达.表达的重组融合蛋白GSR-3C经GST-Agarose亲和层析和分子筛层析纯化后,Western blot检测其反应原性.结果 重组表达质粒pGEx-3C经双酶切及测序证实构建正确；表达的重组融合蛋白相对分子质量约46000,表达量约占菌体总蛋白的50％,主要以可溶性形式表达；纯化后的重组融合蛋白纯度大于90％,可与小鼠抗EV71单克隆抗体特异性结合.结论 成功构建了重组表达质粒pGEx-3C,在大肠杆菌中高效分泌表达并纯化了重组GST-3C融合蛋白,为EV713C蛋白酶结构与功能的研究及3C靶向药物和疫苗的研究奠定了基础.

关键词：肠道病毒A型,人、3C蛋白、原核细胞、基因表达、纯化

所属期刊栏目：25

分类号：R373.2;Q78(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

在线出版日期：2013-03-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：1615-1617