Tollip体外转染HepG2215细胞对HBsAg和HBeAg分泌的影响及其机制

摘要：

目的 探讨Tollip转染人肝癌细胞系HepG2215细胞对HBsAg和HBeAg分泌的影响及其机制,为乙型肝炎的治疗寻找新的靶点.方法 含HA标签的重组表达质粒pCMV-HA-Tollip经EcoR Ⅰ和Kpn Ⅰ双酶切鉴定后,采用脂质体LipofectamineTM 2000转染HepG2215细胞,共设4个转染组:脂质体转染对照组(15μl脂质体)、空质粒转染对照组(6μg空质粒、15μl脂质体)、空质粒重组质粒共转染组(3 μg空质粒、3μg pCMV-HA-Tollip、15μl脂质体)及重组质粒转染组(6μgpCMV-HA-Tollip、15μl脂质体),转染48 h后,收集细胞,经Western blot检测AKT、p-AKT、NF-κB以及HA标签蛋白的表达；收集上清,ELISA法检测HBsAg和HBeAg的水平.结果 重组质粒pCMV-HA-Tollip经双酶切鉴定构建正确.空质粒重组质粒共转染组和重组质粒转染组均有HA标签蛋白的表达,而脂质体转染对照组和空质粒转染对照组无HA标签蛋白表达；与空质粒转染对照组比较,空质粒重组质粒共转染组和重组质粒转染组中NF-κB和p-AKT蛋白的表达明显降低(P＜0.01),而AKT蛋白的表达无明显变化(P＞0.05)；空质粒重组质粒共转染组和重组质粒转染组细胞上清中HBsAg和HBeAg的含量明显低于空质粒转染对照组(P＜0.01),对HBsAg的抑制率分别为24％和41％,对HBeAg的抑制率分别为13％和31％.结论 pCMV-HA-Tollip重组质粒在HepG2215细胞中能有效抑制HBsAg和HBeAg的分泌,其机制可能与抑制AKT的磷酸化和下调NF-κB的表达有关.

关键词：Tollip、HepG2215细胞、转染、肝炎表面抗原,乙型、肝炎e抗原,乙型

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分类号：R373.2+1;Q78(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：重庆市自然科学基金CSTC 2011lljjA10020,CSTC 2009BB5064;重庆医科大学基础医学院青年基金0800280018

在线出版日期：2013-03-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：1587-1590