人松弛素H2类似物在毕赤酵母中的高效表达及其活性

摘要：

目的 利用毕赤酵母表达系统高效分泌表达人松弛素H2类似物(Human relaxin-2 analogue,HR2),并检测其生物活性.方法 通过密码子优化合成HR2基因,构建重组表达质粒pPICZαA-HR2,转化毕赤酵母菌GS115,甲醇诱导表达,并对表达产物进行Tricine-SDS-PAGE和Western blot分析.表达产物经超滤和柱层析纯化后,切除人工C肽,检测其生物活性.结果 经双酶切鉴定和测序证实,重组表达质粒pPICZαA-HR2构建正确；Tricine-SDS-PAGE分析显示,表达的重组蛋白相对分子质量约6 500,表达量占菌体总蛋白的47.6％,为451μg/ml,且为分泌表达；Western blot分析显示,重组蛋白具有良好的反应原性；纯化的重组蛋白纯度达96％；经检测C肽切除的重组HR2对THP-1细胞具有刺激活性.结论 成功在毕赤酵母GS115中高效分泌表达了重组松弛素H2类似物,并具有一定的生物活性.

关键词：人松弛素H2类似物、毕赤酵母、基因表达、生物活性

所属期刊栏目：25

分类号：Q579.1+3;Q786(激素)

在线出版日期：2013-01-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1281-1285