小反刍兽疫病毒F蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备
目的 原核表达小反刍兽疫病毒(Peste des petits ruminants virus,PPRV)F蛋白,并制备多克隆抗体.方法 根据GenBank中登录的PPRV Nigeria 75/1株F基因全长序列,采用DNAStar软件设计去除F基因信号肽和跨膜区的引物,进行RT-PCR扩增,并克隆至原核表达载体pET-32a(+)中,转化E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达.表达的重组蛋白纯化后,进行SDS-PAGE和Western blot分析,免疫BALB/c小鼠,制备多克隆抗体,并初步应用于PPRV的检测.结果 重组原核表达质粒pET-32a(+)-PPRV-F经双酶切和测序证实构建正确;表达的重组F蛋白相对分子质量约59 000,诱导6h表达量最高,且主要以包涵体形式表达;纯化的重组蛋白纯度可达95％以上;免疫小鼠制备的多抗能与纯化的重组蛋白发生特异性反应,抗体效价高于1:64000;间接免疫荧光试验显示,制备的多抗能够识别PPRV Nigeria 75/1株全病毒抗原.结论 原核表达了PPRVF蛋白,并制备了高效价的多克隆抗体,为其进一步研究及小反刍兽疫临床快速检测方法的建立奠定了基础.
小反刍兽疫病毒、F蛋白、原核细胞、基因表达、多克隆抗体
25
S852.65+9.5;R392-33(动物医学（兽医学）)
国家高新技术研究发展计划863计划2008AA10Z411;"十一五"国家科技支撑计划2006BAD06A13-4;"948"项目2007-G57-C;FAO/IAEA项目14515-0;R1;国家公益行业项目200903037-2
2012-11-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
1185-1189
