双启动子双报告基因真核表达质粒的构建及表达

摘要：

目的 构建双启动子双报告基因真核表达质粒,并在293T细胞内进行表达.方法 分别以pEGFP-N1和pDsRed-Nl为模板,PCR扩增EGFP和DsRed基因,插入表达载体pCI中,分别构建重组表达质粒pCI-EGFP和pCI-DsRed,利用载体上BglⅡ和BamH Ⅰ为同尾酶的特点,将两个表达质粒酶切后拼接,构建双启动子双报告基因重组真核表达质粒pCI-cmvDsRed-cmvEGFP,转染293T细胞,荧光显微镜观察EGFP和DsRed的表达,Western blot和流式细胞术检测EGFP和DsRed蛋白的表达.结果 重组真核表达质粒pCI-cmvDsRed-cmvEGFP经酶切鉴定和测序证实构建正确,两启动子为顺向相连;EGFP和DsRed蛋白在293T细胞中可同时正确表达.结论 成功构建了双启动子双报告基因真核表达质粒,并在293T细胞中表达,为实现两种外源基因在真核细胞内的同步表达及示踪提供了有效的分子工具.

关键词：启动子、基因、报告、真核细胞、基因表达

所属期刊栏目：25

分类号：Q782(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金81101667;江苏省基础研究计划自然科学基金资助项目BK2009-071

在线出版日期：2012-11-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1130-1134