产肠毒素大肠杆菌987P菌毛蛋白FasA亚单位的原核表达及其免疫原性

摘要：

目的 表达、纯化产肠毒素大肠杆菌(Enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC) 987P菌毛蛋白FasA亚单位,并检测其免疫原性.方法 将去掉5′端信号肽序列的fasA基因克隆至原核表达载体pQE-30中,构建重组表达质粒pQE-30-fasA,转化E.coli M15,0.5 mmol/L IPTG诱导表达.表达的融合蛋白6×His-FasA经Ni-Agarose His纯化和复性后,经皮下多点注射免疫BALB/c小鼠,每次100 μg,共免疫3次,间隔2周,末次免疫10 d后,摘除小鼠眼球取血,分离血清,采用间接ELISA法检测抗血清效价.结果 重组表达质粒pQE-30-fasA经PCR、双酶切和测序证实构建正确;表达的6×His-FasA融合蛋白相对分子质量约为18 500,主要以包涵体形式表达,表达量占菌体总蛋白的30％;纯化的蛋白纯度可达95％,浓度为0.6 mg/ml,免疫小鼠所得抗血清效价为1:125 000.结论 已成功在E.coli M15中表达了6×His-FasA融合蛋白,纯化的融合蛋白免疫原性良好,为进一步研制以双歧杆菌为表达系统的新型ETEC亚单位口服疫苗奠定了基础.

关键词：产毒素大肠杆菌、菌毛蛋白质类、FasA亚单位、原核细胞、基因表达、免疫原性

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分类号：R378.2+1;R392-33(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家自然科学基金项目资助NSFC 30972585

在线出版日期：2012-11-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1102-1105