人VEGF165和小鼠VEGF164共同抗原表位分析及验证
目的 分析人VEGF165和小鼠VEGF164的共同抗原表位,为血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)表位疫苗的设计和验证奠定基础.方法 分析人VEGF165和小鼠VEGF164蛋白与KDR结合的关键位点,确定其共同表位.将共同表位插入到VEGF骨架蛋白中,扩增含共同表位的骨架蛋白基因,与原核表达载体pET-24a连接,构建重组表达质粒pET-24a-FV,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物经Sephacryl S-100凝胶柱进行纯化,纯化的蛋白进行SDS-PAGE分析.以纯化的表位展示蛋白免疫小鼠,获得免疫血清,ELISA法测定血清效价,Western blot和间接免疫荧光法检测免疫小鼠血清对小鼠VEGF164和VEGF165的识别.结果 人VEGF165和小鼠VEGF164共同抗原表位为KDR 40s loop结合区的EYPDEIEYIFKP;重组表达质粒经双酶切及测序证明构建正确；表位展示蛋白主要以包涵体形式表达,表达量占菌体总蛋白的20％,纯度可达92％；小鼠VEGF164和人VEGF165均能与小鼠免疫血清发生反应,血清效价达到1∶104；免疫血清不仅能识别表位展示蛋白,还能识别小鼠VEGF164和人VEGF165单体和二聚体,还可与人HeLa、小鼠B16肿瘤细胞之间存在阳性反应,表明表位展示蛋白能展示VFGF的共同抗原表位.结论 骨架蛋白展示的VEGF164和VEGF165共同表位免疫小鼠后,能产生针对这两个蛋白的特异免疫反应,证实EYPDEIEYIFKP表位是VEGF164和VEGF165的共同抗原表位.
血管内皮生长因子、抗原表位、免疫
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Q501(一般性问题)
2012-12-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
989-994
