肺炎链球菌表面蛋白C对人嗜中性粒细胞释放CXCL8的影响

摘要：

目的 原核表达肺炎链球菌表面蛋白C(Pneumococcal surface protein C,PspC),并分析该蛋白对人嗜中性粒细胞释放CXCL8的影响.方法 将重组质粒pET-32a(+)/PspC转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达TRx-His-PspC融合蛋白并纯化；通过肠激酶切掉融合蛋白的TRx-His部分,获得PspC蛋白,免疫小鼠,获得抗PspC抗体.分离人外周血嗜中性粒细胞,经MTT法检测PspC蛋白对嗜中性粒细胞增殖活力的影响；QRT-PCR检测PspC蛋白及抗PspC抗体对人嗜中性粒细胞释放CXCL8的影响.结果 表达的TRx-His-PspC融合蛋白相对分子质量约为80 000,目的蛋白约占菌体总蛋白的21％,可与His Tag McAb特异性结合.获得的PspC蛋白相对分子量约为60 000,免疫小鼠获得了高滴度的抗PspC中和抗体(1∶12 000).分离的人外周血嗜中性粒细胞纯度＞98％,活细胞比例大于96％,经不同浓度的PspC蛋白刺激人嗜中性粒细胞,不会引起宿主细胞的细胞毒作用；不同浓度的PspC蛋白刺激人嗜中性粒细胞8h后,CXCL8基因mRNA转录水平显著上调(P＜0.01),且呈剂量依赖性；CXCL8的释放均呈剂量依赖性增强(P＜0.01),且24 h高于12 h；抗PspC抗体可显著抑制PspC蛋白刺激人嗜中性粒细胞释放CXCL8.结论 PspC蛋白可上调人嗜中性粒细胞趋化因子CXCL8的合成和释放,揭示了嗜中性粒细胞和肺炎链球菌致病因素之间的关系,为控制肺炎链球菌侵入性疾病奠定了基础.

关键词：肺炎链球菌、表面蛋白、嗜中性粒细胞、白细胞介素-8

所属期刊栏目：25

分类号：R378.1+4;Q256(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

在线出版日期：2012-12-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：977-981