抗慢性粒细胞白血病细胞人源化单链抗体的原核表达及其活性

摘要：

目的 原核表达抗慢性粒细胞白血病(Chronic myelogenous leukemia,CML)细胞人源化单链抗体(Humanized single-chain variable fragment,hscFv),并检测其抗原结合活性.方法 从重组质粒pUC57-hscFv中扩增hscFv基因,插入含6×His标签的原核表达载体pET-32a(+)中,构建重组表达质粒pET-32a-hscFv,转化E coli BL21(DE3),IPTG诱导表达.表达的重组融合蛋白经Ni2+-NTA亲和层析纯化后,SDS-PAGE分析其纯度;Western blot分析其反应原性;间接免疫荧光试验检测其抗原结合活性.结果 重组表达质粒经PCR、双酶切及测序鉴定证明构建正确;表达的重组融合蛋白相对分子质量约为46 000,表达量约占菌体总蛋白的37％,主要以可溶性形式存在;纯化的重组融合蛋白纯度为94％,可与鼠抗6×His单抗及K562细胞表面抗原特异性结合.结论 成功原核表达并纯化了抗CML细胞hscFv,为其进一步应用于CML的临床分子诊断和生物靶向治疗奠定了基础.

关键词：慢性粒细胞白血病、人源化抗体、原核细胞、基因表达、纯化

所属期刊栏目：25

分类号：R733.72;R392-33(肿瘤学)

资助基金：国家自然科学基金30871102;重庆医科大学优秀博士论文基金2009年

在线出版日期：2012-10-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：877-880