猪瘟病毒E2蛋白基因重组人5型腺病毒的构建及鉴定

摘要：

目的 构建猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV )E2蛋白基因重组人5型腺病毒,并进行鉴定.方法 通过巢式PCR从猪瘟活疫苗中扩增CSFV E2全基因序列,克隆至穿梭质粒pacAd5 CMVK-NpA的多克隆位点处,构建重组穿梭质粒pacAd5 CMVK-NpA-E2,将其线性化后与骨架质粒pacAd5 9.2-100共转染293AD细胞,进行重组腺病毒的包装.细胞完全病变后,采用RT-PCR法检测E2基因mRNA的转录;细胞病变法检测病毒滴度;连续传代后检测病毒的稳定性;Western blot法检测E2蛋白的表达;以105.82 TCID50重组腺病毒经腹腔免疫小鼠,间接ELISA法检测小鼠血清猪瘟抗体效价.结果 重组穿梭质粒paeAd5 CMVK-NpA-E2经双酶切及测序证明构建正确;重组腺病毒rAd5v-MxE2转染的293AD细胞可检测到E2基因的转录和蛋白的表达;重组腺病毒的滴度为105.82 TCID50/ml;第5、30代重组腺病毒均可扩增出目的基因条带,病毒滴度无明显变化;重组腺病毒免疫小鼠后,可产生CSFV抗体.结论 成功构建了CSFV E2基因重组人5型腺病毒,其免疫原性良好,为进一步研制猪瘟基因工程疫苗奠定了基础.

关键词：猪瘟病毒、E2蛋白、腺病毒、免疫原性

所属期刊栏目：25

分类号：S852.65+1;Q782(动物医学（兽医学）)

在线出版日期：2012-10-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：805-808,815