轮状病毒结构蛋白VP6的原核表达及其作为检测抗原在病毒检测中的应用
目的 原核表达轮状病毒(Rotavirus,RV)结构蛋白VP6,并初步应用于以VP6为检测抗原检测RV血清抗体的ELISA方法,用于不同型RV免疫后抗体水平的检测.方法 提取TB-Chen株RV基因组RNA,采用RT-PCR法扩增VP6基因,插入表达载体pETL中,构建重组表达质粒pET-VP6,转化E coli BL21(DE3),表达rVP6.表达的rVP6经纯化后,与TB-Chen株(G2P[4]型)、Wa株(G1P[8]型)和SA11株(G3P[2]型)RV分别免疫豚鼠,制备血清抗体,以SA11株血清抗体,经Western blot 鉴定纯化的rVP6,以纯化的rVP6为检测抗原,采用ELISA法检测不同型RV免疫血清抗体.结果 重组表达质粒pET-VP6经双酶切和测序鉴定证明构建正确;表达的rVP6相对分子质量约为45 000,表达量占菌体总蛋白的34.7％:纯化的rVP6纯度达90％以上,蛋白浓度为8.304 μg／μl,可与豚鼠抗RV SA11株血清抗体发生特异性反应;以纯化的rVP6为检测抗原,可检测TB-Chen、Wa、SA11株和抗rVP6的豚鼠免疫血清抗体.结论 成功地在大肠杆菌中表达了rVP6,以具有共同组／亚组抗原特异性的rVP6作为检测抗原,可检测同一组／亚组内不同型的RV血清抗体,为研制以VP6为检测抗原检测RV感染的ELISA试剂盒奠定了基础.
轮状病毒属、病毒结构蛋白质类、VP6、酶联免疫吸附测定
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R373.9;R392-33(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所研究基金IMB2009YB02
2012-08-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
730-733
