甲型副伤寒沙门菌外膜BtuB蛋白的原核表达、纯化及其免疫保护性
目的 原核表达、纯化甲型副伤寒沙门菌外膜BtuB蛋白,并检测其免疫原性和免疫保护性.方法 采用PCR从甲型副伤寒沙门菌( CMCC 50973)基因组DNA中扩增btuB基因,插入原核表达载体pET-30a中,转化大肠杆菌BL21( DE3),IPTG诱导表达.表达的重组蛋白经分子筛和亲和层析纯化后,免疫BALB/c小鼠,ELISA法检测小鼠血清中抗BtuB IgG抗体效价,并用最小绝对致死剂量活菌攻毒,计算小鼠的保护率.结果 重组原核表达质粒pET-30a-btuB经双酶切和测序证实构建正确;重组蛋白的相对分子质量约为67 000,表达量约为菌体总蛋白的25%,主要以包涵体形式表达;纯化的重组蛋白纯度大于90%,可与鼠抗His-Tag单抗特异性结合;纯化的重组蛋白免疫BALB/c小鼠可获得高效价的抗BtuB IgG抗体,且可获得60%的保护率.结论 成功原核表达并纯化了甲型副伤寒沙门菌外膜BtuB蛋白,重组蛋白免疫原性良好,并能够为小鼠提供一定的保护作用.
甲型副伤寒沙门菌、细菌外膜蛋白质类、BtuB蛋白、原核细胞、基因表达、免疫原性、免疫保护性
25
R378.2±3;R392-33(医学微生物学(病原细菌学、病原微生物学))
2012-08-27(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
672-675