4Aβ1-15的原核表达及纯化

摘要：

目的 在大肠杆菌中表达4Aβ1-15,并进行纯化.方法 以重组质粒pcDNA3.1-s4Aβ1-15为模板,PCR扩增1-2Aβ1-15基因,并克隆至pQE30a原核表达载体中,构建重组表达质粒pQE30a-2Aβ1-15,再以其为模板,扩增2-2Aβ1-15基因,克隆人pQE30a-2Aβ1-5质粒中,构建重组原核表达质粒pQE30a-4Aβ1-15,转化大肠杆菌M15,IPTG诱导表达.表达产物经SDS-PAGE和Western blot鉴定后,采用Ni2+-NTA亲和层析柱纯化目的蛋白.结果 重组表达质粒pQE30a-4Aβ1-15经双酶切和测序证明构建正确;表达的目的蛋白相对分子质量约为18 000,主要以可溶形式表达,表达量约占上清液总蛋白的40％,可与鼠抗人Aβ40单抗特异性结合;纯化后基本除去了杂蛋白.结论 成功构建了重组原核表达质粒pQE30a-4Aβ1-15,表达并纯化了His6-4Aβ1-15融合蛋白,为阿尔茨海默病基因工程疫苗的研究奠定了基础.

关键词：阿尔茨海默病、疫苗、淀粉样β蛋白、原核细胞、基因表达、纯化

所属期刊栏目：25

分类号：Q782;Q786(基因工程（遗传工程）)

资助基金：安徽医科大学科学研究项目2008kj06

在线出版日期：2012-08-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：661-664