表达TNFR-Fc的重组CHO细胞旋转振荡培养工艺的放大及其活性检测
目的:观察在旋转振荡培养工艺放大条件下,表达肿瘤坏死因子受体-Fc融合蛋白(TN FR-Fc)的重组CHO细胞稳定性及其表达产物活性.方法:采用旋转振荡悬浮培养CHO细胞,至对数生长期时,接种不同培养体积(10 ml、250 ml、1.5L),于31℃继续培养,每日取样检测不同培养体积下的细胞密度、细胞活力、融合蛋白浓度；经MabSelect Sure亲和层析柱纯化融合蛋白,采用SDS-PAGE、ElISA、MTT法进行纯化产物的相对分子质量和纯度及结合活性、中和活性的检测.结果:重组CHO细胞在旋转振荡培养条件下,由10 ml放大到1.5L培养体积时,细胞的生长密度、活力及蛋白表达量均相对稳定；纯化的融合蛋白纯度在94％以上,相对分子质量约75 000,可与重组人TNFα特异性结合,其相对亲和力与标准品十分接近,且可中和重组人TNFα的细胞毒效应.结论:明确了表达TNFR-Fc融合蛋白的重组CHO细胞旋转振荡培养工艺放大的可行性,为更大规模发酵生产奠定了基础.
生物反应器、肿瘤坏死因子、融合蛋白、CHO细胞、生物活性
25
R392-33
广州市生物产业化重大专项2010U1-E00541;"重大新药创制"科技重大专项2012ZX09202301-001;2012ZX09103-301-033;中央高校基本科研专项资金暨南大学科研培育与创新基金杰出人才项目1161-1206;广东省产学研项目2010B090400500
2012-09-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
611-614,622
