重组双链RNA依赖的Caspase募集蛋白的表达、纯化及其活性

摘要：

目的:表表达并纯化重组双链RNA依赖的Caspase募集蛋白,并鉴定其生物学活性.方法:将重组质粒pRSETdsCARE转化大肠杆菌BL21(DE3),分别于37、28℃表达目的蛋白,Ni-NTA亲和层析纯化,纯化产物经SDS-PAGE、Western blot、HPLC鉴定目的蛋白,MTT法检测dsCARE对转染poly(I∶C)细胞的增殖抑制作用.结果:dsCARE重组蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中呈组成性稳定表达,平均每升培养基可收获湿菌体约10g；纯化产物的SDS-PAGE纯度达95.8％；纯化的目的蛋白能与抗-His多抗发生特异性反应；HPLC纯度达95.1％；每10g湿菌体可纯化dsCARE重组蛋白约7.5mg,浓度约220μg/ml;纯化的dsCARE重组蛋白与转染poly(I∶C)的HeLa细胞共同孵育,可剂量依赖性抑制HeLa细胞的增殖活性.结论:成功建立了重组dsCARE蛋白的表达、纯化工艺及活性鉴定方法,为其应用和后续研究奠定了基础.

关键词：双链RNA、Caspase、病毒、细胞凋亡

所属期刊栏目：25

分类号：Q786;R392-33(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金海外合作基金30928031;国家自然科学基金81071369

在线出版日期：2012-09-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：557-561