含Coiled-coil结构的PML结构域与CNPY2蛋白相互作用的胞内外验证

摘要：

目的:通过胞内外试验验证含Coiled-coil结构的PML结构域(PML-C)与CNPY2蛋白的相互作用.方法:将质粒pACT2-CNPY2和pGBKT7-PML-C共转化入酵母菌AH109,通过酵母双杂交技术检测CNPY2蛋白和PML-C在AH109细胞内的相互作用；构建重组质粒pCMV-HA-PML-C和pCMV-Myc-CNPY2,共转染HEK293细胞,采用Western blot法检测细胞中CNPY2蛋白的表达；免疫共沉淀技术从胞外验证两种蛋白的相互作用.结果:pACT2-CNPY2和pGBKT7-PML-C质粒共转化人AH109酵母菌后,可见蓝色阳性克隆；重组质粒pCMV-HA-PML-C和pCMV-Myc-CNPY2共转染的HEK293细胞的全细胞裂解液可与鼠抗c-MYC单抗特异性结合；经免疫共沉淀可检测到与PML-C相互作用的蛋白复合体.结论:通过酵母双杂交试验和免疫共沉淀技术证实,PML-C与CNPY2蛋白存在相互作用.

关键词：PML-C、CNPY2蛋白、酵母双杂交系统、免疫共沉淀

所属期刊栏目：25

分类号：Q591.2;Q78

资助基金：国家自然科学基金81171658;重庆市自然科学基金计划重点项目2011BA5037

在线出版日期：2012-09-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：553-556