乙型肝炎病毒HBx基因shRNA真核表达质粒的构建及鉴定

摘要：

目的:构建乙型肝炎病毒HBx基因shRNA真核表达质粒,并筛选能有效抑制HBx表达的干扰序列.方法:设计并构建针对HBx基因的3个siRNA表达质粒,经酶切和DNA测序鉴定,转染HepG2.2.15细胞,荧光显微镜观察细胞转染效率,RT-PCR检测HepG2.2.15细胞中HBx基因mRNA的转录水平,Western blot检测HepG2.2.15细胞中HBx蛋白的表达水平.结果:酶切和测序鉴定质粒构建正确,插入片段的碱基序列符合实验设计；质粒转染HepG2.2.15细胞后,HBx基因的转录水平、相对表达量及HBx蛋白的表达水平均明显降低(P均＜0.01),3个重组质粒均能抑制HBx蛋白的表达,且质粒shRNA-HBx3抑制能力最强.结论:已成功构建了靶向HBx基因的shRNA真核表达质粒,并筛选出具有高效沉默HBx基因的shRNA质粒,为进一步研究HBx感染合并肝细胞脂肪变性的发生发展奠定了基础.

关键词：肝炎病毒、乙型、X蛋白、RNA干扰、基因表达

所属期刊栏目：25

分类号：R373.2+1;Q782(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家自然科学基金30871160

在线出版日期：2012-09-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：549-552