重组免疫毒素EBI3-Luffin P1原核表达质粒的构建、表达及其生物学活性

摘要：

目的 构建重组免疫毒素EBI3-Luffin P1的原核表达质粒,在大肠杆菌中进行表达,纯化后初步检测其生物学活性.方法 从质粒pET-32a-EBI3中扩增EBI3基因,与合成的Luffin P1基因连接,克隆至原核表达载体pET-32a(+)中,构建重组质粒pET-32a-EBI3-Luffin P1,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达.表达的重组EBI3-Luffin P1蛋白经亲和层析纯化后,Western blot检测其反应原性,体外试验初步鉴定其生物学活性.结果 重组质粒pET-32a-EBI3-Luffin P1经双酶切及测序证实构建正确；表达的重组EBI3-Luffin P1蛋白相对分子质量约为50 000,主要以包涵体形式存在,诱导8h表达量可达菌体总蛋白的44％；纯化的重组蛋白纯度约为98％,可与EBI3蛋白免疫小鼠血清发生特异性反应,并可显著抑制小鼠脾脏细胞分泌IFNγ.结论 成功构建了重组免疫毒素EBI3-Luffin P1的原核表达质粒,表达并纯化了重组蛋白,为进一步研究其在缓解、治疗免疫性疾病及红白血病中的作用奠定了基础.

关键词：免疫毒素、EB病毒诱导基因3、Luffin P1、基因表达、生物学活性

所属期刊栏目：25

分类号：Q511;Q78(蛋白质)

在线出版日期：2012-06-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：324-328