恒河猴粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子的基因合成、原核表达及纯化

摘要：

目的 人工合成恒河猴粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(Macaca mulatta granulocyte-macrophage colony stimulating factor,mGM-CSF)基因,在大肠杆菌中高效表达并纯化.方法 根据大肠杆菌遗传密码子偏爱性优化设计并合成mGM-CSF基因,克隆至原核表达载体pET-43.1a(+)中,构建重组表达质粒pET-43.1a-mGM-CSF,转化大肠杆菌BL21-CodonPlus( DE3)-RIPL,IPTG诱导表达.表达的重组mGM-CSF蛋白经Sephacryl S-200分子筛层析纯化,复性后,Western blot检测其反应原性,MTT法检测其生物学活性.结果 重组表达质粒pET-43.1a-mGM-CSF经双酶切及测序证实构建正确；表达的重组蛋白相对分子质量约为15000,表达量约占菌体总蛋白的30％,主要以包涵体形式存在；纯化复性后的重组蛋白纯度可达95％以上,并可与大鼠抗人GM-CSF单克隆抗体特异性结合,比活性为1.2×107 IU/mg.结论 在大肠杆菌中高效表达了重组mGM-CSF蛋白,纯化复性后的蛋白具有良好的生物学活性.

关键词：恒河猴、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子、重组、原核细胞、基因表达、纯化、生物学活性

所属期刊栏目：25

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

在线出版日期：2012-06-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：309-313